Pretractament de cultius cel·lulars i teixits

Els cultius cel·lulars requereixen un pretractament específic abans de l'extracció de ADN. Per als cultius en suspensió, el procés implica recollir les cèl·lules, eliminar el medi de cultiu mitjançant centrifugació, i rentar les cèl·lules. En el cas dels cultius en monocapa, es pot realitzar l'extracció directament al flascó o transferir les cèl·lules a un tub després de desenganxar-les.

Definition: Cultiu en monocapa - Cèl·lules que creixen adherides a la superfície del recipient de cultiu.

Per als teixits animals o vegetals, és necessari un procés d'homogeneïtzació previ a l'extracció. Això es pot aconseguir mitjançant mètodes mecànics o químics.

L'homogeneïtzació mecànica pot ser manual, utilitzant un morter i nitrogen líquid, o automatitzada, utilitzant esferes de vidre o ceràmica. L'homogeneïtzació química implica l'ús de proteases i detergents per degradar els components tissulars.

Highlight: L'ús de nitrogen líquid en l'homogeneïtzació mecànica manual ajuda a prevenir la formació de cristalls que podrien causar lisi cel·lular prematura.

Example: En l'homogeneïtzació química, s'afegeix la mostra a una mescla d'incubació que conté proteases i detergents per digerir el teixit.

Pretractament d'altres tipus de mostres biològiques

Per a l'extracció i purificació dels àcids nucleics d'altres tipus de mostres, com cultius de bacteris i llevats, cèl·lules de la mucosa oral i esputs, es requereixen protocols específics de pretractament.

En el cas dels cultius de bacteris i llevats, el procediment varia segons si el cultiu és en medi líquid o sòlid. Per als cultius en medi líquid, es centrifuga el tub per eliminar el medi de cultiu sobrenedant i el sediment es ressuspèn en un tampó de suspensió.

Vocabulary: Tampó de suspensió - Solució que manté les cèl·lules en suspensió i les protegeix durant el procés d'extracció.

Per a les cèl·lules de la mucosa oral, existeixen diversos mètodes d'obtenció com el raspat, l'esbandida o la recollida directa de saliva. Aquests mètodes són menys invasius i poden ser útils per a estudis genètics o forenses.

Example: El raspat de la mucosa oral amb un bastonet de cotó és un mètode comú per obtenir cèl·lules per a l'extracció de ADN.

Els esputs requereixen un pretractament especial per a la detecció de patògens respiratoris. Aquest procés pot implicar la liqüefacció de la mostra i la concentració dels microorganismes presents.

Highlight: El pretractament adequat de les mostres d'esput és crucial per a la detecció precisa de patògens respiratoris mitjançant tècniques moleculars.

La lisi cel·lular és un pas comú en tots aquests processos, ja que permet alliberar els àcids nucleics de l'interior de les cèl·lules. Aquesta etapa és fonamental per a l'èxit de l'extracció de ADN fenol-cloroformo o altres mètodes d'extracció.

Definition: Lisi cel·lular - Procés de ruptura de la membrana cel·lular per alliberar el contingut intracel·lular, incloent els àcids nucleics.

Altres Tipus de Mostres Biològiques

El processament d'altres tipus de mostres com bacteris, llevats i esputs requereix protocols específics.

Vocabulary: Els cultius bacterians poden créixer en medi líquid o sòlid, necessitant diferents aproximacions de pretractament.

Example: Per a cèl·lules de la mucosa oral, es poden utilitzar diferents mètodes:

• Raspat
• Esbandida
• Recull directe de saliva

Highlight: Cada tipus de mostra requereix consideracions específiques per optimitzar l'extracció d'àcids nucleics.

Verificació i Consideracions d'Extracció

La verificació de la lisi cel·lular és crucial per assegurar una extracció eficient. L'extracció de RNA por columna pot requerir tractaments addicionals.

Highlight: És essencial obtenir una solució homogènia sense grumolls per confirmar una lisi cel·lular efectiva.

Quote: "Quan l'ARN pot interferir en els estudis, s'ha d'eliminar mitjançant l'addició d'ARNasa A."

Mètodes de Purificació

Els mètodes de purificació inclouen l'ús d'isopropanol fred en extracció de ADN i esferes magnètiques.

Definition: La purificació és el procés de separació dels àcids nucleics d'altres components cel·lulars.

Example: En la purificació amb esferes magnètiques, s'utilitza un imant per atraure les partícules amb l'ADN adherit.

Pretractament de mostres biològiques per a l'extracció d'àcids nucleics

El pretractament de les mostres biològiques és el primer pas crucial en l'extracció i purificació dels àcids nucleics. Aquest procés varia segons el tipus de mostra, però l'objectiu comú és obtenir una suspensió cel·lular adequada per a l'extracció.

Per a mostres de sang, el pretractament més habitual implica la lisi dels glòbuls vermells per eliminar l'hemoglobina, que pot interferir en les tècniques de biologia molecular. Aquest procés es realitza en tres passos principals: lisi dels glòbuls vermells, centrifugació de la mostra, i eliminació del sobrenedant.

Highlight: L'eliminació de l'hemoglobina és crucial per evitar interferències en les tècniques posteriors de biologia molecular.

En el cas de les cèl·lules mononucleades de sang perifèrica $PBMC$, s'utilitza un mètode de centrifugació en gradient de densitat. Aquest procés és especialment útil per a l'estudi dels àcids nucleics de retrovirus que infecten limfòcits.

Example: Per obtenir PBMC, es col·loca la sang sobre un medi de separació i es centrifuga, formant capes diferents segons la densitat de les cèl·lules.

Vocabulary: PBMC - Cèl·lules mononucleades de sang perifèrica, importants per a l'estudi de retrovirus.