Pretractament de mostres biològiques per a l'extracció d'àcids nucleics

El pretractament de les mostres biològiques és el primer pas crucial en l'extracció i purificació dels àcids nucleics. Aquest procés varia segons el tipus de mostra, però l'objectiu comú és obtenir una suspensió cel·lular adequada per a l'extracció.

Per a mostres de sang, el pretractament més habitual implica la lisi dels glòbuls vermells per eliminar l'hemoglobina, que pot interferir en les tècniques de biologia molecular. Aquest procés es realitza en tres passos principals: lisi dels glòbuls vermells, centrifugació de la mostra, i eliminació del sobrenedant.

Highlight: L'eliminació de l'hemoglobina és crucial per evitar interferències en les tècniques posteriors de biologia molecular.

En el cas de les cèl·lules mononucleades de sang perifèrica (PBMC), s'utilitza un mètode de centrifugació en gradient de densitat. Aquest procés és especialment útil per a l'estudi dels àcids nucleics de retrovirus que infecten limfòcits.

Example: Per obtenir PBMC, es col·loca la sang sobre un medi de separació i es centrifuga, formant capes diferents segons la densitat de les cèl·lules.

Vocabulary: PBMC - Cèl·lules mononucleades de sang perifèrica, importants per a l'estudi de retrovirus.

Pretractament de cultius cel·lulars i teixits

Els cultius cel·lulars requereixen un pretractament específic abans de l'extracció de ADN. Per als cultius en suspensió, el procés implica recollir les cèl·lules, eliminar el medi de cultiu mitjançant centrifugació, i rentar les cèl·lules. En el cas dels cultius en monocapa, es pot realitzar l'extracció directament al flascó o transferir les cèl·lules a un tub després de desenganxar-les.

Definition: Cultiu en monocapa - Cèl·lules que creixen adherides a la superfície del recipient de cultiu.

Per als teixits animals o vegetals, és necessari un procés d'homogeneïtzació previ a l'extracció. Això es pot aconseguir mitjançant mètodes mecànics o químics.

L'homogeneïtzació mecànica pot ser manual, utilitzant un morter i nitrogen líquid, o automatitzada, utilitzant esferes de vidre o ceràmica. L'homogeneïtzació química implica l'ús de proteases i detergents per degradar els components tissulars.

Highlight: L'ús de nitrogen líquid en l'homogeneïtzació mecànica manual ajuda a prevenir la formació de cristalls que podrien causar lisi cel·lular prematura.

Example: En l'homogeneïtzació química, s'afegeix la mostra a una mescla d'incubació que conté proteases i detergents per digerir el teixit.